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光谱仪和分光光度计

简要描述:光谱仪和分光光度计是将成分复杂的光分解为光谱线的科学仪器

  • 产品型号:
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2024-05-06
  • 访  问  量:449

产品概述

品牌WPI价格区间面议
产地类别进口应用领域医疗卫生,环保,食品,化工,综合

仪器概况

       光谱仪(spectrometer)和分光光度计(Spectrophotometer),是将成分复杂的光分解为光谱线的科学仪器。

       当光线通过某种物质的溶液时透过的光的强度减弱,因为有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光 被组成此溶液的物质所吸收,只有一部分光可透过溶液。因此:

入射光=反射光+分散光+吸收光+透过光。

如果我们用蒸馅水(或组成此溶液的溶剂)作为“空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的损失,则 出现:

入射光=吸收光十透过光。

        不同的光源都有其发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。不同物质都有特定的吸收光谱,根据溶液的吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质成分。

        钙灯发射光谱:鸨灯光源所发出380〜780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、黄、绿、 蓝、靛、紫组成的连续色谱,该色谱可作为可见光分光光度计的光源。

        氢灯(或笊灯)发射光谱:氢灯(或気灯)能发出185-400nm波长的光谱,可作为紫外光光度计的光源。

常用的波长范围包括:

(1)     200〜380nm的紫外光区;

(2)     380~780nm的可见光区;

(3)     2.5〜25卩m (按波数计为4000/®米〜400/厘米)的红外光区。

       用于测量200〜380nm的紫外光区物质吸光度的仪器为紫外分光光度计;

       用于测量380〜780nm的可见光区物质吸光度的仪器为可见光分光光度计(或比色计):

       用于测量2.5〜25〃 m (按波数计为4000/厘米〜400/厘米)的红外光区物质吸光度的仪器为红外分光光度计 或原子吸收分光光度计。

工作原理

       光谱仪和分光光度计釆用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源, 光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品 的浓度成正比。

       单色光辐射穿过被测物质溶液吋,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比, 其关系如下式:

A=-lg(I/Io)=-lgT=kLc

式中:A为吸光度:Io为入射的单色光强度;1为透射的单色光强度:T为物质的透射率;k为摩尔吸收系数; L为被分析物质的光程,即比色皿的边长;c为物质的浓度;

 

仪器用途

1.    核酸的定量

       核酸定量是紫外光谱仪和紫外分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核昔酸,单链、 双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260nm。

        除了核酸浓度,光谱仪和分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值, 用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nmo

       纯净的样品,比值大于1.8 (DNA)或者2.0 (RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类 物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比 值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品,A320一般是0。

2.    蛋白质的直接定量(UV法)

       这种方法是在280nm波长直接测试蛋白,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法, 将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存 在一些杂质,一般要消除320nm的“背景"信息。

3.    比色法蚩白质定量

       蛋白质通常是多种蛋白质的混合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸) 与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反映的氨基酸数目直接相关,从而 反映蛋白质浓度。比色方法一般有BCA、Bradford、Lowry等儿种方法。

4.    细菌细胞密度(OD 600)

       实验室确定细菌生长密度和生长期,多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验,需要 釆用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养 液作为空白液,之后定量培养后的含菌培养液。

5.    海洋学研究中痕量物质浓度

       WPI公司设计长光程液态样本流通池(LWCC)具有50、100、250和500不同的光程可以选择。因此,不同 光程长度的LWCC配合适的光源和检测器,常用于海洋学应用中营养物分析的流体注射分析系统(如硝酸盐、 亚硝酸盐、磷酸盐和铁离子检测等)。海水和淡水中CDOM (有色溶解有机物含量)的检测,因为海水中CDOM的 含量极低(0.007m-l)。

6.    大气环境中超低含量物质浓度

      大气中的SO2、硝酸盐、亚硝酸盐、羟基、棕碳、黑碳、水溶性铁、气溶胶等含量很低,使用普通的分光光 度计很难检测出来。将大气中釆集的样本液态化,再配合不同光程的LWCC进行检测,可以将这些含量极低的 物质加以检出。


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