| 品牌 | 弦华生物 | 产地类别 | 国产 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 综合 |
弦华生物T7 RNA 体外转录试剂盒
货号:EB0011
英文名称:T7 RNA Transcription Kit
产品规格:10T 50T 100T
【产品介绍】
T7 RNA Polymerase是一种源自T7噬菌体的酶，它是一种DNA依赖的RNA聚合酶，具有高度的特异性，仅识别T7启动子序列。这种酶在分子生物学研究中扮演着重要角色，尤其是在体外转录和基因表达分析中。T7 RNA Polymerase能够从含有T7启动子的模板DNA高效合成RNA，其转录活性不受真核细胞内RNA聚合酶II的启动子或增强子的影响，因此可以用于精确控制RNA的合成。此外，T7 RNA Polymerase在转录过程中对模板DNA的亲和力高，能够在较低的酶浓度下实现高效的转录，这使得它在高通量实验中尤为有用。
【试剂盒组成】
组分 | 10次 | 50次 | 100次 |
5*T7 RNA Polymerase Buffer | 40 μl | 200 μl | 400 μl |
ATP Solution | 15 μl | 75 μl | 150 μl |
CTP Solution | 15 μl | 75 μl | 150 μl |
GTP Solution | 15 μl | 75 μl | 150 μl |
UTP Solution | 15 μl | 75 μl | 150 μl |
EnzymeMix | 5 μl | 100 μl | 150 μl |
RNase Inhibitor | 5 μl | 25 μl | 50 μl |
RNase-free ddH2O | 100 μl | 500 μl | 1000 μl |
Control DNA | 2 μL (500 ng/μl) | 5 μL (500 ng/μl) | 10 μL (500 ng/μl) |
【注意事项】（操作前仔细阅读）
1．用于RNA合成的器具须用0.1% DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液37°C浸泡12 h；然后在121°C高压灭菌20 min去除残留的DEPC。
2．请使用不含RNA和DNA酶的枪头、离心管进行实验。
3．RNA聚合酶和RNA酶抑制剂避免反复冻融；放置冰上后请尽快使用。
4．实验时请佩戴一次性手套及口罩以避免产物被RNase降解
5．转录前请先电泳确定模板为单一片段或模板纯度＞90%。
6．进行体外转录合成 RNA 时，本产品不仅适用于含有 T7 promoter 的线性plasmid，也适用于带有 T7 promoter序列的PCR 产物、oligo DNA等。
7．如遇转录效果不佳，可自行多加RNase Inhibitor或对 EnzymeMix 稀释2-4倍使用，（注:试剂盒中带有阳性对照转录模板，加入量为1μl/20μl体系）。
8．本产品仅供科研使用。
【标准转录步骤】
1．将除EnzymeMix和RNase Inhibitor 外的组分振荡混匀，短暂离心收集于管底，冰上储存备用。
2．将四种核苷酸分子等比例配成rNTPs预混液。配置好的预混液可在-20℃放置2个月。
3．按下表配制反应体系（也可根据实验需求按照此加入配比等比例扩大或缩小总体系），建议模板加入0.1-1 μg（注：加入各转录组分时请最后加入转录模板）。
组分 | 体积（μl） |
5*T7 RNA Polymerase Buffer | 4 |
rNTPs | 6 |
EnzymeMix | 2 |
RNase Inhibitor | 0.5 |
Template DNA | X μl（0.1-1 μg） |
RNase-free ddH2O | up to 20 μl |
4．用移液器轻轻混匀各组分，并短暂离心收集，37°C孵育3 h。
【存储及保存】
存储缓冲液：20 mM pottasium phosphate buffer, 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA,1 mM DTT, 50% (v/v) glycerol, pH 7.5 25ºC。
T7 RNA Polymerase Buffer (5*)：600 mM HEPES-KOH(pH7.6), 120 mM MgCl2, 200 mM DTT, 10 mM spermidine。
弦华生物T7 RNA 体外转录试剂盒【存放说明】
-20ºC保存，至少一年有效。可以分装后在-80ºC长期保存。
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